Evaluación del potencial de diferenciación osteogénico de células madre mesenquimales in vitro en medio suplementado con plasma pobre en plaquetas como posible terapia en aplicaciones óseas

Abstract

El proceso de curación óseo puede verse limitado debido a condiciones y patologías como la edad, la diabetes, o la anemia severa. Esto hace que no haya una cicatrización efectiva, causando una fractura ósea no consolidada. Tradicionalmente se han empleado métodos quirúrgicos y no quirúrgicos que pueden no llegar a ser del todo efectivos. Esto ha llevado a que diversas investigaciones se enfoquen en el potencial uso de Células Madre Mesenquimales (MSCs) junto a suplementos para cultivo celular, los cuales han presentado dificultades al momento de ser empleados en la proliferación y diferenciación de estas. Es por esto que se han aplicado diferentes tratamientos en la medicina regenerativa usando suplementos derivados de la sangre como es el Plasma Rico en Plaquetas (PRP), ya que, por su alto contenido de factores de crecimiento estimula la diferenciación osteogénica. Sin embargo, no se tenía en cuenta el uso de Plasma Pobre en Plaquetas (PPP) por su bajo contenido de factores a comparación del PRP. Pese a que el volumen obtenido de PPP es mayor al de PRP. Es por esto que en este proyecto se usó PPP como suplemento de cultivo celular, para evaluar y analizar el potencial de diferenciación osteogénico de MSCs in vitro. Por lo tanto, MSCs obtenidas de tejido adiposo se cultivaron y diferenciaron en medio suplementado con tres concentraciones diferentes de PPP: 5%, 10% y 15%, junto con su respectivo control. En breve, se cultivaron 4000 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑛𝑢𝑐𝑙𝑒𝑎𝑑𝑎𝑠/𝑐𝑚2 en generación 7 durante aproximadamente 44 días, se realizó conteo en cámara de Neubauer y se calculó la duplicación celular (NCPD), y el tiempo de duplicación (CPDT). Mientras que para el ensayo de diferenciación osteogénica se sembraron 8000 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑛𝑢𝑐𝑙𝑒𝑎𝑑𝑎𝑠/𝑐𝑚2 de Generación 7 y Generación final (resultante de la proliferación) por triplicado en las concentraciones ya mencionadas de PPP. La deposición de fosfatos de calcio y la morfología se evaluaron mediante tinción de Alizarin Red, Rodamina y DAPI a los 7, 14 y 21 días de diferenciación. Se obtuvo como resultado que pasado el tiempo de estudio (semana 3) la tasa de proliferación similar al control fue de 0.9158 con un intervalo de confianza de 0.0041 para el 5% de PPP, mientras que para las demás concentraciones las células redujeron su capacidad proliferativa. Adicionalmente, se evidenciaron depósitos de calcio, inducidos por las diferentes concentraciones de plasma empleadas. Se tuvo un potencial de diferenciación mayor para las concentraciones de 10% y 15%, y se presentó muerte celular en ambas generaciones evaluadas. Finalmente, en cuanto a la morfología celular, se evidenció que el fenotipo celular cambió transcurrido el tiempo de ensayo, tomando una forma más ancha y alargada en su citoplasma. El 15% de PPP produjo mayor diferenciación celular en la Generación 7 a diferencia de la Generación final. A partir de los resultados obtenidos y las recomendaciones presentadas, se hace necesario realizar más estudios, dando pie a futuras investigaciones para la curación de tejido óseo.